Срубы и бани по всей России
Вот уже 10 лет на рынке

Вибростанок для блоков: Купить вибростанки для производства строительных блоков своими руками (шлакоблок, арболит, опилкобетон)

• alexxlab
• 02.02.197024.06.2021
• 0

Вибростанок для блоков, Прессовщик-1 цена 5 900 руб

Приобретая вибростанок для блоков в нашей компании, вы получаете БЕСПЛАТНО!

Уже полностью готовый на 100% к работе станок.

Составы смесей для всех бетонных изделий от лучших технологов.

5 лет гарантированной бесперебойной работы станка.

Будет установлен вибродвигатель Российского производителя (никакого Китая!)

Идеальную геометрию матрицы вибропресса, которая будет производить вам высококачественный блок точно по ГОСТу!

Годовую консультацию наших экспертов по оборудованию.

Помощь в запуске, наладке оборудования.

Самую низкую стоимость доставки по России (Так как мы одни из самых крупных партнеров ТК России)

Все необходимые документы.

Правила эксплуатации станка.

 Включать станок в сеть 220 В с заземленным проводом.

 Время работы шлакоблочного станка кратковременно (до 2 минут непрерывно).

 Двигатель вибратора не должен перегреваться.

 Вода (влага) и раствор не должны попадать на включатели/выключатели, на корпус двигателя и токоведущие провода.

 После работы вибростанок необходимо очистить от загрязнения.

Комплектация станка для блоков:

 Станок на 1 блок

 Прижимная рамка

 Специальные электро-выключатели (и элементы пуска двигателя)

 Инструкция по эксплуатации (Паспорт на станок)

 Рекомендуемая рецептура составов рабочей смеси в зависимости от вида блока прилагается БЕСПЛАТНО

Принцип работы станка для блоков:

Замес в бетоносмесителе жесткого бетона (водоцементное соотношение 0,5)

Загрузка станка

Выравнивание уложенной смеси в станке мастерком до нужного уровня, и если нужно, при этом производится штыковка смеси в углах форм

При включенном вибраторе в течении от 20 до 60 секунд, в зависимости от качества бетона, это достигается опытным путём в процессе работы

Вибратор отключается в момент подъёма станка

Блок готов, — …следующий!

Завод работает с 2011 года в Саратовской области

Более 4000 единиц произведенного оборудования

Мы используем только качественные комплектующие и даем гарантию на приобретенные у нас станки. 

Связаться с продавцом

Станок для блоков своими руками – простое оборудование для изготовления керамоблоков, шлакоблоков, арболитовых, газосиликатных и других строительных блоков

В наше стремительное время на рынке стройматериалов появляется все новая продукция, преуспевающая по многим показателям своих предшественников. Интересным фактом является то, что некоторые стройматериалы можно изготовить в домашних условиях. Русский народ, не избалованный деньгами и благами цивилизации, может придумать многое для того, чтобы сэкономить и самореализоваться.

Собственноручное изготовление блочных строительных материалов

Явным подтверждением этого является изготовленный своими руками станок для блоков. Он понадобится любителям, которые могут сами построить сарай, баню, гараж, и даже жилой дом, из своих пеноблоков, газоблоков, керамоблоков, шлакоблоков, опилково-бетонных (арболитовых) и других блоков с разными наполнителями. Зная пропорцию составных частей, экспериментируя на входящих ингредиентах, с ним можно изготовить блочный строительный материал собственноручно на строительство любых помещений и даже на закладку фундамента.

ЧИТАТЬ ПО ТЕМЕ:
Разработка своими руками чертежей вибростола для утрамбовки строительных смесей

Различное количество ячеек в форме

В зависимости от масштабности производства и возможностей, изготавливают формы для блоков своими руками, рассчитанные на 1-2 изделия, 6-8 изд., 10-14 шт., 21- 30 ед. и др.(фото 1). Они рассчитаны для изготовления цельных блоков и изделий с пустотами различной формы. Поменяв размеры матрицы, можно производить блоки, пригодные для стен и для фундамента. Потому размеры блоков и их количество может быть разным (ф.2). Для удобства извлечения готового изделия, следует предусмотреть разборную конструкцию. Материалом для изготовления форм может быть металл, водостойкая фанера, древесина. Формы – это своего рода съемная опалубка, которая позволяет изготовить качественный строительный материал с нужными заданными характеристиками.

Фото 1 — Формы для блоков различной величины

Фото 2 — Строительные пустотелые блоки

Фото 3 — Заготовки стенок для форм

Фото 4 — Цилиндры для заполнения пустот

Этапы изготовления форм для блоков своими руками

Для изготовления металлических матриц понадобится листовая сталь б-3 мм и металлическая труба D 8 мм для формирования пустот, а также болгарка, сварочный аппарат, другие рабочие инструменты.

• Подготавливаются заготовки для стенок. Их можно вырезать в домашних условиях болгаркой 450х210 и 220х210 по 2 заг. Дно формы должно иметь бортик высотой 3-3,5 см и ручку. На стенках делаются насечки (ф.3 ).
• Для изготовления пустот потребуются цилиндры (фото 4). Для этого, от трубы отрезается нужное количество заготовок из расчета 3 ед. на 1 блок. Высота должна быть на несколько мм меньшей от высоты стенок. Для придания трубной заготовке конусной формы, с одной стороны нужно до половины разрезать трубу и зажать тисками. Каждую трубную заготовку нужно заварить с обеих сторон, получатся пустотелые заглушенные цилиндры (заполнители). Они привариваются к планке, затем вставляются в форму и планка приваривается к стенкам формы (ф. 5).
• Заваривать все швы необходимо снаружи.
• Из толстостенной пластины делаем пресс с отверстиями с диаметром, превышающим диаметр пустотных цилиндров. Пресс должен заходить на матрицу, примерно на 50 мм. К прессу привариваются ручки (фото 6).

Готовые формы для блоков своими руками не требуют больших затрат. С ними могут работать люди, не имеющие особенной квалификации. Главное, выполнить правильный замес и уплотнить содержимое.

Фото 5 — Пустотелые цилиндры привариваются к планке

Фото 6 — Изготовление ручного преса

Фото 7 — Чертеж самодельного станка с вибромотором

Фото 8 — Поэтапное изготовление станка для блоков своими руками

Станки для блоков своими руками

Для того, чтобы хорошо утрамбовать смесь для блочных стройматериалов, можно пользоваться вибростолом или изготовить станок для блоков своими руками с прикрепленным к боковине вибратором. На фото 7 предложен чертеж вибрационного станка. Готовую конструкцию оснащают ручками, которые помогают снять матрицу без повреждения сырой бетонной заготовки. Приваренные к несущей раме колесики создают передвигающееся устройство.

Фото 8 предлагает поэтапное изготовление оборудования на одну заготовку. Оно сходно с производством форм без двигателя. Прикрепленный вибратор облегчает работу и делает готовый стройматериал более качественным. Применение станочного оборудования для изготовления стройблоков – совсем несложное. Но, при работе с ним следует придерживаться техники безопасности.

ЧИТАТЬ ПО ТЕМЕ:
Можно ли изготовить пенобетон своими руками в домашних условиях и как?

Вывод

Для мастеров, которые не бояться экспериментировать и творить, изготовление форм или вибростанка для производства блоков не составит труда. Кроме того, они сами воспользуются своими механизмами и получат достаточное количество строительного материала.

Вибростанок для производства блоков сделать

Тщательные расчеты помогут определить, какой из имеющихся вариантов экономически целесообразнее. Данный подвид строительного оборудования массовому потребителю практически незнаком, но вибропрессы изготовляются многими отечественными фирмами. Единого стандарта, касающегося принципов расчета конструкции, здесь нет, но классификация таких агрегатов существует, пускай даже условная.

Вибростанки разделяются по следующим признакам:. С точки зрения последнего фактора вибропрессы промышленного производства подразделяются на три подкласса. Наиболее простое и конструктивно примитивное оборудование предполагает в основном ручной труд, с его помощью можно производить один шлакоблок за рабочий цикл.

Такая производительность относительно невысокая, потому что за рабочую смену вы сможете сделать лишь 50 строительных блоков.

Метки: вибростанок для блоков, шлакоблоки

Устройства, позволяющие производить за один цикл несколько шлакоблоков, отличаются большей производительностью, но требуют использования физического труда и задействования в технологическом процессе нескольких работников. Профессиональный вибростанок для блоков может производить более трех единиц готовой продукции за цикл. Будучи оснащенным множеством дополнительных устройств и приспособлений, высокопроизводительный вибростанок существенно облегчает рабочий процесс, предполагая использование минимальных объемов ручного труда.

Стоимость таких устройств может сильно разниться, ведь они ориентированы на разные категории потребителей. Станки бюджетной категории отличаются настолько простой конструкцией, что некоторые специалисты предпочитают делать такие агрегаты самостоятельно. При этом технические характеристики самодельных вибростанков по важным эксплуатационным характеристикам не уступают заводским.

Необходимость иметь в своем распоряжении вибропресс далеко не очевидна.

Тем более, если речь идет о частном строительстве. Поэтому приведем обоснование тех случаев, когда наличие вибростанка вибропрессовочного агрегата действительно необходимо:.

При производстве шлакоблоков на заводе применяют стандартные железные формы.

Возможность продать оборудование после окончания строительства — другая причина не отказываться от использования собственного вибростанка. Можете не сомневаться, что найдутся люди, которые придерживаются одинаковых с вами взглядов на принципы ведения строительных работ.

Когда строительство ведется в удаленной местности, наличие вибростанка избавит строителей от дополнительных расходов, связанных с транспортировкой стройматериалов. Заставить отказаться от покупки вибростанка, производства блочных стройматериалов на месте могут следующие факторы:.

Частное строительство не обходится без использования такого материала как блоки. Они бывают кирпичные или отлитые из ячеистого бетона основной материал для раствора. По назначению делятся на фундаментные, стеновые и теплоизолирующие. Могут быть полнотелыми и пустотелыми.

Формы должны быть разборными, чтобы готовый шлакоблок можно было легко достать. Последний вопрос, который придется решить — покупать вибропресс для изготовления шлакоблочных изделий или попытаться сделать устройство своими руками.

Если масштабы строительства невелики, очевидно, что намного дешевле будет собрать агрегат самостоятельно, благо конструкция простейших моделей подобных устройств не поставит перед вами никаких сверхзадач.

Главные элементы вибропрессовочных станков — матрица для изготовления блоков и наличие механизмов, обеспечивающих вибропрессование. Чертеж такого агрегата можно посмотреть в данной статье.

Из нее вы узнаете про способ изготовления шлакоблока своими руками при помощи вибростанка. Домашнее производство не позволяет выдержать технологию, т. Главной деталью самодельного станка является матрица или форма для сырьевой смеси. Матрица сама по себе уже станок, который можно задействовать, выполняя часть операций вручную.

А если у вас имеются навыки обработки металла, то особых затруднений не предвидится. Сделать вибростанок своими руками — задача для инициативного исполнителя несложная.

Оборудование для производства шлакоблоков в домашних условиях

Используя чертеж, болгаркой раскроите стальной лист и с помощью сварки сформируйте форму, состоящую только из боковых стенок если предусматривается производство двух-трех-четырех блоков за цикл — позаботьтесь о возведении перегородок, которые допускается делать из тонкостенного материала, толщиной 1, мм. Если придерживаться действующих промышленных стандартов, размер шлакоблока составит хх мм, но никто не запрещает делать блоки по собственным размерам.

Проверьте правильность имени. Please enter letter, number or punctuation symbols. Блоки Компании Журнал Форум Тендер. Хотите знать, где делают хорошие блоки? Вступите в нашу группу VK.

Снизу к форме вибростанка привариваются планки, делающие устройство устойчивым при сильных вибрациях это обязательное требование. Изготовление пустотелой продукции позволяет существенно сэкономить на цементе и других составляющих раствора.

Для этого в конструкции матрицы предусматривается наличие съемных или жестко закрепленных конусных пустотообразователей.

Как сделать вибростанок для производства блоков своими руками?

Поскольку крайне желательно изготавливать шлакоблоки с точно повторяемыми геометрическими размерами, для обеспечения стандартной высоты готового изделия сделайте ограничитель, ниже которого пресс опускаться не будет.

Вибропрессование — уплотнение полусухой бетонной смеси, когда последняя, находясь в пресс-форме, подвергается давлению сверху. Пресс представляет собой пластину с вырезами под пустотообразователи, к которой приварены рукоятки. Именно с помощью пресс-формы и вибратора, разумеется строительный раствор уплотняется. Мотор устанавливается на боковую грань формы вибропресса, в виброустановку двигатель превратит эксцентрик — это дополнительный грузик, жёстко устанавливаемый на вал двигателя.

Незначительные усовершенствования конструкции позволят облегчить формирование строительных блоков своими руками. Обеспечив устройство несложной рычажной системой, вы уменьшите физическую нагрузку, затрачиваемую при опускании пресса. Промышленный крупногабаритный агрегат для производства шлакоблоков. Как уже было сказано, станки для шлакоблоков нередко используются для производства шлакоблоков и теплоблоков.

Шлакоблоки — это строительные конструкции , которые изготавливаются из цементной смеси, в которую добавляются разнообразные примеси.

Как правило, это доменные шлаки, не содержащие уголь и золу, но не редко для изготовления шлакоблоков своим руками в бытовых условиях используется кирпичная крошка, щепа , керамзит, щебенка, либо опилки. Шлакоблоки помимо состава материала в пропорции, который использовался для их изготовления, классифицируются по форме.

Происходит разделение изделий на пустотелые, перегородочные, а также блоки с прямоугольными и круглыми отверстиями. Конструкция блоков зависит от того, какая виброформа применялась для их изготовления. Касаемо теплоблоков — это конструкции, созданные из керамзитобетона , обладающие внутренним слоем из твердого теплоизоляционного материала — пенополистирола , пенопласта, либо минеральной ваты высокой плотности.

Изготовление теплоблоков требует наличия специальной модификации вибростанка, которая обладает двусторонней матрицей, в середине которой предусмотрено свободное пространство для размещения теплоизоляционного материала.

Все вибростанки можно условно разделить на две основные категории — классический вибропресс такие станки для шлакоблока, как Марс, Дракон и т. Вибропресс БУЛАТ-М применяется для производства тротуарной плитки, бордюра, шлакоблока, фактурного блока и керамзитоблока.

Вибростолы как правило используются для производства шлакоблоков, либо тротуарной плитки. По сути, они представляют собою обычный стол, на углах которого, между рамой и столешницей расположены пружины, обеспечивающие равномерное распределение вибрации.

Как изготовить станок для производства шлакоблока своими руками

За создание вибрации отвечает вибромотор, либо переделанный электродвигатель, в случае изготовления вибростола своими руками, который монтируется на нижнюю поверхность столешницы.

Технология изготовления шлакоблоков и теплоблоков на таком столе основывается на использовании специальных форм, в которых заливается раствор. Формы ставятся на поверхность вибростола, и раствор в них уплотняется под воздействием вибрации. Вибропресс обладает более сложной конструкцией — он состоит из пуансонной рамы ручки , которая управляет прижимной рамой, рабочей матрицы и вибродвигателя.

Это крайне важно, поскольку производство теплоблоков, шлакоблоков, керамзитобетонных и железобетонных строительных изделий в пропорции нередко выполняется прямо на рабочем месте.

Оборудование для изготовления шлакоблоков

Классическая модель вибрационного стола. Матрица изготавливается в виде металлического короба, оборудованного круглыми, либо прямоугольными вставками, посредством которых формируются пустоты внутри готовых изделий. Для изготовления своими руками малогабаритного станка на 2 блока, будет достаточно нижеуказанных материалов:.

Такие шлакоблоки можно изготавливать с помощью самодельного станка.

Примерно такая матрица должна в итоге получится. Более того, Марс является полностью разборным агрегатом, что значительно облегчает его транспортировку.

Также оборудование для производства шлакоблоков Марс может оборудоваться сменными матрицами, предназначенными как для производства изделий с круглыми, либо квадратными отверстиями, так и для перегородочных блочных изделий.

Назначение самодельного шлакоблока

На рынке существуют вариации станка Марс как с двухблочными, так и с трехблочными матрицами. Пробовал делать сам, точность страдает в итоге после 2 меясцев мучений плюнул и купил заводсткой станок. Называется Сибирь вроде, пока доволен.

Термошейкер для инкубирования и охлаждения, одинарный блок

Лучший в отрасли термошейкер с исключительными характеристиками нагрева / охлаждения с высокоскоростным встряхиванием Термошейкеры OHAUS разработаны для систем нагрева и охлаждения, которые требуют постоянного и точного высокоскоростного встряхивания с надежным контролем температуры от 17 ° C ниже комнатной до 100 ° C. Если требуется точность, температура может быть откалибрована пользователем. Настройте приложения с помощью сменных блоков для размещения пробирок и микропланшетов.Интуитивно понятный сенсорный экран позволяет пользователю просматривать все этапы программы, отслеживая ход выполнения.

Стандартные характеристики:

• Лучшие в своем классе температурные характеристики. Усовершенствованная электроника и программное обеспечение позволяют быстро и точно контролировать температуру, которой можно доверять. Модели с охлаждением достигают температуры на 17 ° C ниже температуры окружающей среды.
• Интуитивно понятный сенсорный экран для простого управления и программирования. Установите функции и экранную справку на одном из шести языков, чтобы помочь пользователю в работе с устройством.
• Легко создавайте программы для повторных приложений. Хранение пяти отдельных 5-ступенчатых программ. Порт USB позволяет передавать тестовые данные на флэш-накопитель для регистрации данных и хранения программ.

Приложения

ДНК, РНК, клеточные культуры, гибридизации, исследования белков

Дисплей

Цветной сенсорный ЖК-дисплей с диагональю 4,3 дюйма (10,9 см) с возможностью программирования на шести языках

Эксплуатация

Съемный 3-проводной шнур и вилка (в комплекте), для устройства требуется блок — совместим с блоками Eppendorf Thermomixer® R

Связь

USB-порт обеспечивает большую гибкость при сборе и передаче данных

Строительство

Корпус Valox cool touch, съемная пластиковая стойка, крышка и отвертка для снятия блока (в комплекте)

Особенности конструкции

Индикатор горячего верха, звуковая сигнализация, функция ограничения максимальной температуры, функция приоритета температуры, импульсный / быстрый режим смешивания, режим калибровки температуры, функция скорости изменения температуры

Характеристики:

• Лучшие в своем классе температурные характеристики
• Интуитивно понятный сенсорный экран для простого управления
• Простое создание программ для повторных приложений

Технические характеристики:

Прочие стандартные функции и оборудование

Установки

ISTHBLHTS и ISTHBLCTS поставляются с блоком для 24 пробирок по 1,5 мл, съемным штативом и крышкой. Съемный трехжильный шнур и вилка (в комплекте).Дополнительные функции: индикатор горячего верха, звуковая сигнализация, функция ограничения максимальной температуры, функция приоритета температуры, импульсный / быстрый режим смешивания, режим калибровки температуры, функция скорости изменения температуры

Labgear Multi-Therm Shaker Thermal Blocks

Продукты под торговой маркой Labgear гарантируют отсутствие дефектов материалов, изготовления и изготовления в течение двух (2) лет с даты покупки, за исключением следующего:
— В расходных материалах, изнашиваемых и одноразовых деталях гарантируется отсутствие дефектов изготовления и материалов в течение девяноста (90) дней с даты покупки.
— Ультрафиолетовые осветительные лампы и фильтры гарантируются без дефектов изготовления и материалов в течение девяноста (90) дней с даты покупки.

Если в течение гарантийного срока расходные материалы, компоненты или оборудование под маркой Labgear выходят из строя или работают со сбоями из-за дефектов изготовления, изготовления или качества, Labgear обязуется осмотреть неисправный или вышедший из строя продукт и иметь возможность отремонтировать, восстановить или заменить любую часть (части), по единоличному мнению Labgear, изначально были дефектными или стали таковыми в условиях нормального использования и обслуживания, а также при возврате расходных материалов, деталей, компонентов или оборудования первоначальному покупателю.

Никакая гарантия не распространяется на любую часть, компонент или оборудование, или любую их часть, которые подверглись несчастному случаю, небрежности, переделке, неправильному обращению или неправильному использованию после первоначальной продажи. Более того, Labgear не дает никаких гарантий в отношении деталей, не поставленных Labgear или установленных, используемых и / или обслуживаемых, кроме как в строгом соответствии с инструкциями, приведенными в этом руководстве.

Ни при каких обстоятельствах Labgear не несет ответственности перед конечным пользователем за любой случайный или косвенный ущерб, независимо от того, предвидится он или нет, включая, помимо прочего, материальный ущерб, невозможность использования оборудования, потерю бизнеса, упущенную выгоду или неудобства, возникшие в результате или связаны с использованием инструментов производства Labgear.Labgear также не несет ответственности за любые телесные повреждения, возникшие в результате использования, установки и / или обслуживания оборудования.

Данная гарантия не отменяет каких-либо установленных законом прав, которые могут быть доступны в некоторых странах.

Benchmark Scientific H5000-H MultiTherm Shaker со сменными блоками только для нагрева, 115 В: Amazon.com: Industrial & Scientific

• Убедитесь, что это подходит
  введя номер вашей модели.
• Контроль температуры от 0 до 100 ° C

• Сменные блоки, для тюбиков от 0,2 до 50 мл

• Колодцы с прецизионными контурами для равномерного теплообмена

• Модель только с функцией нагрева

]]>

Характеристики

Блоки для печати с фотогравировкой | Музей шейкер

Печатный блок семейного жилого дома церкви на горе Ливан, Хирам Фергюсон, Олбани, Нью-Йорк, ок.1883 г., Музей Шейкера | Гора Ливан, 1957 г. 8469.1

Печатный блок Дома собраний Горы Ливан, Хирам Фергюсон, Олбани, штат Нью-Йорк, ок. 1883 г., Музей Шейкера | Горный Ливан, 1957 г. 8469,1

Эти два печатных блока были изготовлены методом фотогравировки и при нанесении чернил и печати создают полутоновое изображение — поверхность для печати, состоящую из маленьких точек для получения изображения, которое показывает некоторое затенение, а не является полностью черным и белый. Здания на кварталах — Дом собраний на горе Ливан (1824 г.) и церковное семейное жилище на горе Ливан (1875 г.) — все еще стоят.Изображения основаны на фотографиях; изображение Дома собраний взято со стереографа, созданного Джеймсом Ирвингом из Трои, штат Нью-Йорк, где-то до 1873 года, и, хотя исходная фотография, на которой основано изображение жилища, до сих пор нам неизвестна, она датируется датой строительство завершилось в 1876 году. Дом собраний был приобретен музеем Шейкера | Гора Ливан в 1957 году из материалов, которые были перевезены в деревню Хэнкок Шейкер после закрытия Горы Ливан. Блок с изображением Жилища был приобретен в 2009 году у независимого дилера, который проследил его происхождение от Элдресс Эммы Б.Король в Кентербери, штат Нью-Гэмпшир, 1950-е годы.

Outing: иллюстрированный журнал о отдыхе, 2 (июнь 1883 г.), стр. 1

Дом собраний в Горном Ливане, напечатано в Outing, 1883 г., стр. 2

Оба блока использовались для иллюстрации статьи «Странные и любопытные люди. Век шейкерной жизни на холмах Ливана », в июньском 1883 году в номере журнала Outing: иллюстрированный журнал о развлечениях. Outing, , опубликованный в Бостоне, штат Массачусетс, выходит второй год и первоначально был посвящен велосипедному спорту как популярному виду отдыха.В первый год он был опубликован под названием The Wheelman. Вероятно, «Шейкеры» предлагались как интересная экскурсионная поездка в рамках поездки по Ливанским холмам.

Стационарная библиотека, Церковная семья, Гора Ливан, Нью-Йорк, ок. 1890, Шейкер-музей | Горный Ливан, 1950.4255.2

Статья появилась в то время, когда Шейкеры использовали аналогичные иллюстрации деревень Шейкеров в качестве обложки для своей публикации, Манифест, , но ни одна из этих иллюстраций никогда не использовалась в той или какой-либо другой публикации Шейкер.Поэтому кажется вероятным, что издатели Outing сделали блоки специально для статьи и могли хранить их в течение нескольких лет, что сделало невозможным использование изображений Shakers. Похоже, что позже Шейкеры смогли приобрести блоки, потому что до конца века блок, изображающий Жилище, использовался на бланках бланков Семейной библиотеки Церкви на горе Ливан.

Реклама для Хирама Фергюсона из Городского справочника Олбани за 1883 год

Сами блоки были изготовлены в Олбани, штат Нью-Йорк, Хирамом Фергюсоном, наиболее известным в мире шейкеров как гравер по дереву, создавший изображения стульев Shaker и овальных коробок, которые использовались для иллюстрации любого количества каталогов стульев Shaker.Для иллюстраций в каталогах стульев Фергюсон также работал по фотографиям, но он использовал фотографии в качестве основы для своих гравюр на дереве — формы искусства, которой он был наиболее известен в 1870-х годах. Чтобы изготовить несколько копий гравюр на дереве, чтобы их можно было использовать в течение многих лет для публикации каталогов стульев, Фергюсон попросил бы их скопировать как металлические блоки — процесс, который был намного дешевле, чем копирование гравюр на дереве. Рекламы Фергюсона в различных каталогах Олбани в 1870-х годах продвигали его как гравера по дереву, но к 1880-м годам он добавил в свой репертуар «Фотоэлектро-пластины» и «Электротипирование».

Помимо истории Шейкеров и их отношений с Хирамом Фергюсоном, в газете Rochester, New York, Democrat and Chronicle от 30 декабря 1900 года было отмечено, что накануне «Одно из самых смелых преступлений, совершенное когда-либо совершалось в этом городе [Олбани, штат Нью-Йорк], и мотив, который окутан тайной, произошел сегодня, когда Хирам Фергюсон, которому около 75 лет, страдает от перелома черепа, и его выздоровление сомнительно. В качестве оружия использовался шейкер, которым нападавший дважды ударил Фергюсона по уху….Нападавший до сих пор ускользнул от полиции ».

Очевидно, что об этих печатных блоках можно узнать больше. Мы надеемся, что любой, кто знает источник изображения Жилого дома или дополнительное использование этих изображений в публикациях Shaker или других изданиях, будет достаточно любезен, чтобы поделиться ими.

Нравится:

Нравится Загрузка …

PowerBLOCK Shaker | Heat Block (Блочный инкубатор) | Тепловой блок, шейкер | Продукты ATTO

Тепловой блок, шейкер
Тепловой блок (блочный инкубатор)

WSC-2630 PowerBLOCK Shaker

Возможно перемешивание образцов во время инкубации, а температура установки составляет от 0 до 100 ^o C.

Нет необходимости в охлаждаемой или термостатической комнате или дополнительных камерах.

При использовании в качестве обычного блочного инкубатора, он также совместим с более конкретными приложениями, такими как анализ иммунопреципитации, ELISA, очистка ДНК / РНК Bid, которая требует перемешивания во время реакции.

Назначение и особенности применения Технические характеристики Брошюра по продукту Дополнительные аксессуары

WSC-2630 Шейкер PowerBLOCK

Назначение и применение

• Иммунопреципитация
• ELISA
• Очистка ДНК бизнес
• Реакция ферментов

Характеристики

• Контроль температуры со встряхиванием!
• Широкий диапазон регулирования температуры!
• Высокотемпературная скорость
• Превосходная точность контроля температуры

• Программируется до 5 файлов
• Доступно для подключения запрограммированных файлов

• Различный выбор блоков

Технические характеристики

Выбираемые блоки

* Каждый блок не обязателен.

* Блок для микропробирок 0,2–1,5 мл имеет конусообразное дно, а блок для микропробирок 2 мл — круглое.

WSC-2630 можно использовать с точностью до температуры, без добавления воды или масла.

* Блок для центрифужной пробирки с плоским дном.

Заливая воду в трубку, WSC-2630 можно использовать с точностью до температуры.

* Блок типа A (для микропробирок 0,2 мл) наносится на планшет для ПЦР.

* Блок типа J для тарелок доступен с блоками производства Eppendorf, Nunc, Falcon и т. Д.

* Внутренний размер типа L (для планшета с глубокими лунками) составляет 130 (Ш) x 88 (Г) x 40 (В) мм.

Крышка типа L может использоваться при температуре до 80 ℃.

* Типы G и H не подходят для смешивания.

* Состояние перемешивания зависит от емкости, вязкости раствора, объема раствора, скорости вращения и т. Д.

* Материалы блока

Брошюра по продукту

(0.95 МБ)

Скачать

Вы можете скачать различные документы (PDF)

Блок шейкерных K + каналов с помощью κ-конотоксина Pviia зависит от государства | Журнал общей физиологии

κ-конотоксин PVIIA является первым конотоксином, который, как известно, взаимодействует с потенциалозависимыми калиевыми каналами, подавляя токи, опосредованные Shaker . Мы изучили механизм ингибирования и пришли к выводу, что PVIIA блокирует ионные поры со стехиометрией 1: 1 и что связывание с открытыми или закрытыми каналами сильно различается.Свойства открытого канала проявляются в релаксации частичного блока во время ступенчатой ​​деполяризации, тогда как протоколы с двумя импульсами характеризуют более медленное повторное уравновешивание связывания с закрытым каналом. В 2,5 мМ- [K ⁺ ] _o , IC ₅₀ повышается с тонического значения ∼50 до ∼200 нМ во время открытия при 0 мВ, и увеличивается в е-раз примерно на каждые 40 мВ увеличения. по напряжению. Это изменение связано, главным образом, с зависимостью от напряжения и 20-кратным увеличением при 0 мВ скорости диссоциации PVIIA, но также и с пятикратным увеличением скорости ассоциации.Связывание PVIIA с каналами Shaker Δ6-46, лишенными инактивации N-типа, или с дикими фенотипами, похоже, похоже, но инактивация частично защищает последние от разблокировки открытого канала. Повышение [K ⁺ ] _o до 115 мМ мало влияет на связывание с открытым каналом, но почти в 10 раз увеличивает тоническую IC ₅₀ PVIIA из-за уменьшения на тот же фактор скорости ассоциации токсина на закрытые каналы. По аналогии с харибдотоксиновым блоком, мы связываем ускорение диссоциации PVIIA из открытых каналов с зависимым от напряжения заполнением ионами K ⁺ участка на внешнем конце проводящей поры.Мы также утверждаем, что занятость этого сайта внешними катионами препятствует связыванию с закрытыми каналами, тогда как очевидная конкуренция исчезает в открытых каналах, если конкурирующий катион может перемещаться по поре. Сделан вывод, что PVIIA также может быть ценным инструментом для исследования состояния ионной проницаемости внутри поры.

Токсины плотоядных морских конусных улиток были полезными инструментами для изучения активируемых напряжением кальциевых и натриевых каналов (Olivera et al.1985, Olivera et al. 1990). Недавно мы сообщили об электрофизиологических эффектах κ-конотоксина PVIIA, первого члена нового семейства конотоксинов, которые взаимодействуют с потенциалзависимыми калиевыми каналами (Terlau et al. 1996). Используя систему экспрессии ооцитов Xenopus , было показано, что PVIIA ингибирует токи Shaker K ⁺ , но не токи, опосредованные гомологами крысиного семейства Kv1, испытанными до сих пор (Terlau et al. 1996). Было показано, что тот же токсин действует также на один из двух вариантов сплайсинга гомолога омара Shaker (Kim et al.1997). Подобно токсинам скорпиона из семейства харибдотоксинов (CTX) ¹ (Miller 1995), PVIIA, по-видимому, связывается с внеклеточным устьем ионной поры, поскольку его взаимодействие с канальным белком сильно модифицируется мутациями некоторых аминокислотных остатков, которые как полагают, формируют преддверие внешней поры (Shon et al. 1998). Исследования спектроскопии ядерного магнитного резонанса (Scanlon et al. 1997; Savarin et al. 1998) показывают сильное сходство между сворачиванием PVIIA и CTX, но различия в остатках, которые наиболее сильно влияют на связывание двух токсинов, делают PVIIA интересным инструментом для дополнительная информация о молекулярной структуре калиевых каналов.В частности, мутация F425G, которая увеличивает аффинность связывания CTX каналов Shaker более чем на три порядка (Goldstein et al. 1994), имеет противоположный эффект, делая каналы PVIIA нечувствительными (Shon et al. 1998).

В этой статье мы изучаем механизм ингибирования PVIIA каналов Shaker, и Shaker, Δ6-46 каналов, в которых отсутствует быстрая инактивация N-типа.Наш анализ показывает, что зависимая от напряжения модификация частично подавляемых токов (Scanlon et al. 1997) не может быть приписана изменению стробирования каналов, модифицированных токсином; например, как наблюдалось для связывания токсина яда пауков Hanatoxin (Swartz and MacKinnon 1997). Вместо этого наши результаты согласуются с гипотезой о том, что токсин блокирует проникновение в канал посредством связывания 1: 1 с порой и обязан своими очевидными свойствами модификатора стробирования зависимости его связывания от состояния проводимости канала.Мы опишем релаксацию блока во время активирующих импульсов, показав, что связывание PVIIA с открытыми каналами характеризуется сильно зависящей от напряжения скоростью отключения и нечувствительностью к напряжению, а также восстановлением тонического блока во время периодов покоя, показывая, что связывание с закрытыми каналами имеет независимую от напряжения и гораздо более медленную кинетику. Мы обнаружили, что свойства блока PVIIA каналов дикого типа Shaker Δ6-46 и Shaker схожи, за исключением того, что инактивация частично защищает последний от вызванной деполяризацией разблокировки, что согласуется с предположением, что токсин воспринимает только проводящее состояние канала.По аналогии с блоком CTX Са-активированных каналов K ⁺ (MacKinnon, Miller, 1988) и каналов Shaker (Goldstein, Miller, 1993), наши данные согласуются с идеей о том, что зависимость связывания PVIIA с открытыми каналами от напряжения является главным образом косвенный эффект взаимодействия с ионами калия, занимающими внешнюю позицию в поре. Мы также будем утверждать, что связывание с закрытыми каналами, особенно его чувствительность к внешнему K ⁺ , можно описать тем же типом взаимодействия токсин – K ⁺ .Последовательная молекулярная модель показывает, что помимо использования в качестве структурного зонда преддверия внешней поры, PVIIA также может быть ценным инструментом для исследования более интимных свойств пути ионной проводимости.

ооцитов из Xenopus laevis получали, как описано ранее (Stühmer 1992). РНК вводили в ооциты V – VI стадий, и токи регистрировали через 1–7 дней после инъекции.Токи всей ячейки регистрировали при двухэлектродном ограничении напряжения с использованием усилителя Turbo-Tec (npi Electronic). Внутриклеточные электроды были заполнены 2 M KCl и имели сопротивление от 0,6 до 1,0 МОм. Текущие записи были отфильтрованы нижними частотами на 1 кГц (-3 дБ) и дискретизированы на 4 кГц. Для записи «патч-зажим» (Hamill et al., 1981) пипетки из алюмосиликатного стекла имели сопротивление от 0,8 до 1,2 МОм. Раствор пипетки содержал (мМ): 115 KCl, 1,8 EGTA, 10 HEPES, pH 7.2 с КОН. Токи измеряли с помощью усилителя патч-зажима EPC-9, управляемого программным пакетом Pulse + PulseFit (HEKA Elektronik). Текущие записи подвергались фильтрации нижних частот на 3 кГц (-3 дБ) и дискретизации с частотой 10 кГц.

Раствор ванны в электрофизиологических экспериментах представлял собой раствор нормальной лягушки Рингера (NFR), содержащий (мМ): 115 NaCl, 2,5 KCl, 1,8 CaCl2, 10 HEPES, pH 7,2, с NaOH, или K ⁺ -Рингер, содержащий (мМ) : 115 KCl, 1.8 CaCl ₂ , 10 HEPES, pH 7,2 с КОН. Токи утечки и емкостные токи корректировались в оперативном режиме с использованием метода P / n. Во всех экспериментах желточные оболочки ооцитов удаляли механически с помощью тонких щипцов. Раствор токсина добавляли в камеру ванны с помощью пипетки с наконечником Gilson. Указанные концентрации токсина соответствуют конечной концентрации в ванне.

Как показано Terlau et al.В 1996 году основным эффектом PVIIA на каналы Shaker -h5 является обратимое снижение пиковых токов фиксации напряжения с дозовой зависимостью, которая согласуется со связыванием токсина с одним участком белка канала, где он блокирует проникновение ионов.

На рис. 1А показаны наложенные токовые реакции на три различные ступенчатые деполяризации, записанные для одного и того же ооцита до и после добавления в ванну 500 нМ PVIIA.Все пиковые амплитуды снижаются примерно в 10 раз под действием токсина, что соответствует IC ₅₀ блока PVIIA ~ 50 нМ. Однако при более внимательном рассмотрении выясняется, что ход токов во времени заметно изменяется. На рис. 1B показано, что отношение U (для вероятности разблокировки) токсина к контрольным реакциям для того же напряжения увеличивается после времени достижения пика, приближающегося к значению позднего установившегося состояния, которое для

\ begin {equal *} {\ mathrm {V}} \; = \; 60 \; {\ mathrm {mV}} \ end {формула *}

⁠, примерно в пять раз больше.Хотя этот эффект развивается в начале инактивации, этот эффект нельзя отнести к разблокировке инактивированных каналов, поскольку он сильно увеличивается с увеличением V в диапазоне, где вероятность установившегося состояния и постоянная времени инактивации довольно постоянны, ∼0,9 и ∼3,5 мс. соответственно. Сплошные линии на рис. 1 B соответствуют одноэкспоненциальной аппроксимации U ( t ), давая асимптотические значения, которые увеличиваются с 0,21 при

\ begin {уравнение *} {\ mathrm {V}} \; = \; 0 \ ; {\ mathrm {mV}} \ end {формула *}

до 0.46 при

\ begin {уравнение *} {\ mathrm {V}} \; = \; 60 \; {\ mathrm {mV}} \ end {уравнение *}

⁠, а постоянные времени уменьшаются с 27 до 6,3 мс . Эти данные могут быть связаны с некоторым усредненным ослаблением связывания токсина с открытыми и инактивированными каналами, но развертывание процессов связывания и инактивации не будет простым, поскольку их кинетика, по-видимому, происходит в аналогичном временном диапазоне. Тем не менее, подобранные асимптотические значения U ( t ) могут быть использованы для оценки кажущейся константы диссоциации, K ^(O) _app , связывания PVIIA с открытыми (неинактивированными) каналами.{({\ mathrm {O}})} _ {\ mathrm {app}}} (0) \; = \; 115 \; {\ mathrm {nM \; и \; v}} _ {{\ mathrm {s}}} \; = \; 45 \; {\ mathrm {mV}} \ end {формула *}

⁠. Средние значения K ^(O) _app (0) и v _s из четырех разных ооцитов, протестированных с концентрациями токсина от 100 до 500 нМ, составили 125 нМ и 46 мВ (таблица, столбцы 2 и 5).

Доказательства того, что инактивация каналов Shaker -h5 является демпфирующим фактором, а не причиной вышеуказанных эффектов, предоставлено исследованием делеционного мутанта Shaker –Δ6-46 ( Sh -Δ), который не имеет быстрого инактивация (Hoshi et al.1990). В согласии со Scanlon et al. 1997, мы обнаружили, что токи, опосредованные Sh -Δ каналами, кажутся даже более сильно модифицированными присутствием частично блокирующих концентраций внеклеточного PVIIA. На рис. 2А показаны токи фиксации напряжения для шагов до -10, +10 и +30 мВ, записанные для ооцита, экспрессирующего каналы Sh -Δ, до и после добавления в ванну 200 нМ PVIIA. Видно, что токсин сильно снижает раннюю фазу, но оказывает гораздо меньшее влияние на установившееся состояние токов.Токи, измеренные во время полуактивации нормальных ответов, уменьшаются при всех напряжениях чуть более чем в пять раз, что указывает на константу диссоциации PVIIA из блокирующего сайта ∼50 нМ, близкую к расчетной для каналов Shaker -h5 из снижение пиковых токов. Однако это раннее снижение ослабевает во время импульса, и токи приближаются к асимптотическим значениям, которые постепенно приближаются к уровням, свободным от токсинов, при увеличении деполяризации. В отличие от случая с модификатором стробирования Hanatoxin из яда пауков (Swartz and MacKinnon 1997), мы показываем, что эти эффекты можно объяснить, если предположить, что связывание PVIIA блокирует поровую проводимость без существенного изменения стробирования канала и что открытие канала снижает связывание токсина. сродство, увлекающее повторное уравновешивание в сторону более низкой вероятности блока.Согласно этой интерпретации, отношение U токсина к управляющим токам измеряет долю незаблокированных каналов и, как предполагается, имеет несколько отличительных свойств, которые характеризуют простую реакцию второго порядка ассоциации канал-токсин (Схема I), где {U} и {B} представляют собой, соответственно, разблокированный канал или канал, заблокированный ассоциацией с токсином, и где k ^(O) _off и k ^(O) _на , соответственно, константа скорости диссоциации первого порядка и константа скорости ассоциации второго порядка связывания токсина во время ступенчатой ​​деполяризации.Первый прогноз состоит в том, что после ступенчатого изменения параметров связывания U (t) должна следовать одноэкспоненциальной релаксации от значения покоя к равновесному значению, установленному новыми условиями связывания. На рис. 2B показано это свойство для дискретных значений напряжения с шагом 0, 20, 40 и 60 мВ. Плавные линии соответствуют U (t) с единичными экспонентами, возрастающими от того же начального значения, U ^(C) ∼ 0,19, к асимптотическим значениям, U ^(O) , и с постоянными времени, τ ^(O) , которые зависят от напряжения ступени.Для V ≥ -20 мВ вероятность открытого канала близка к своему максимуму, и мы обнаруживаем, что τ ^(O) всегда намного больше, чем время полуактивации нормальных токов. Следовательно, эти релаксации развиваются почти исключительно тогда, когда каналы полностью активированы, и это оправдывает использование верхнего индекса (O) для параметров, которые их характеризуют.

(Схема I)

Второе ожидание состоит в том, что зависимость U ^(C) и U ^(O) от концентрации токсина [T] должна соответствовать простым изотермам Ленгмюра:

\ begin {уравнение *} {\ mathrm {U}} ^ {\ left \ left ({\ mathrm {C}} \ right) \ right} = \ frac {{\ mathit {K}} ^ {\ left \ left ({\ mathrm {C}} \ right) \ right}} {\ left \ left [{\ mathrm {T}} \ right] \ right + {\ mathit {K}} ^ {\ left \ left ({ \ mathrm {C}} \ right) \ right}} {\ mathrm {; U}} ^ {\ left \ left ({\ mathrm {O}} \ right) \ right} = \ frac {{\ mathit {K }} ^ {\ left \ left ({\ mathrm {O}} \ right) \ right}} {\ left \ left [{\ mathrm {T}} \ right] \ right + {\ mathit {K}} ^ {\ left \ left ({\ mathrm {O}} \ right) \ right}} {\ mathrm {,}} \ end {уравнение *}

, где K ^(C) и K ^(O) — константы диссоциации, характеризующие, соответственно, равновесное связывание PVIIA с покоящимися (закрытыми) или активированными (открытыми) каналами.На рис. 3 показан один эксперимент, в котором [T] постепенно изменяли от 0 до 10, 20, 50, 100, 200, 500 нМ, 1 мкМ и обратно до 0. На каждом [T] стандартная серия значений тока. — Отклики напряжения на различные импульсные потенциалы, V _p , регистрировали с 5-секундными интервалами стимуляции при удерживающем потенциале -100 мВ. На рис. 3 A показана [T] зависимость ответов на

\ begin {equal *} {\ mathrm {V}} _ {{\ mathrm {p}}} \; = \; 20 \; {\ mathrm { мВ}} \ end {формула *}

⁠. Обратите внимание, что запись, полученная после отмывания 1 мкМ раствора PVIIA, показывает небольшой «выброс» препарата и очень небольшую остаточную разблокировку, которую мы приписываем оставшемуся присутствию нескольких наномолярных PVIIA вокруг ооцита.{{\ mathrm {O}}} \ left \ left [{\ mathrm {T}} \ right] \ right \ right) \ right} {\ mathrm {.}} \ end {уравнение *}

Оценки τ ^(O) из однократных экспоненциальных аппроксимаций на рис. {({\ mathrm {O}})} _ {{\ mathrm {on}}} \ end {Equation *}

⁠.

Значения k ^(O) _от и k ^(O) _на , соответствующие данным τ ^(O) на рис.3 D, соответственно, 29 с ⁻¹ и 88 мкМ ^-1 с ^-1 , дают действительно такую ​​же оценку K ^(O) ∼ 330 нМ, что и соответствие данных U ^(O) на рис. 3C.

В большинстве экспериментов на одном и том же ооците тестировались только две концентрации токсина, или эксперименты проводились для одного значения [T] в диапазоне 100–500 нМ.Согласованность результатов этих экспериментов с бимолекулярным характером реакции токсин-блокирования косвенно подтверждается совпадением оценок K ^(O) , k ^(O) _от и k ^(O) _на , полученное из единичных измерений U ^(O) и τ ^(O) в любом заданном состоянии согласно обратным отношениям:

\ begin {уравнение *} K ^ {\ left \ left ({\ mathrm {O}} \ right) \ right} = \ frac {\ left \ left [{\ mathrm {T}} \ right] \ right * {\ mathrm {U}} ^ {\ left \ left ({\ mathrm {O}} \ right) \ right}} {1 — {\ mathrm {U}} ^ {\ left \ left ({\ mathrm {O }} \ right) \ right}} {\ mathrm {;}} k _ {{\ mathrm {off}}} ^ {\ left \ left ({\ mathrm {O}} \ right) \ right} = \ frac { {\ mathrm {U}} ^ {\ left \ left ({\ mathrm {O}} \ right) \ right}} {{\ mathrm {{\ tau}}} ^ {\ left \ left ({\ mathrm { O}} \ right) \ right}} {\ mathrm {;}} k _ {{\ mathrm {on}}} ^ {\ left \ left ({\ mathrm {O}} \ right) \ right} = \ frac {1 — {\ mathrm {U}} ^ {\ left \ left ({\ mathrm {O}} \ right) \ right}} {\ left \ left [{\ mathrm {T}} \ right] \ right * {\ mathrm {{\ tau}}} ^ {\ left \ left ({\ mathrm {O}} \ right) \ right}} {\ mathrm {.}} \ end {уравнение *}

1

Наиболее интересной особенностью релаксации PVIIA-блоков является их сильная зависимость от напряжения. В эксперименте, показанном на фиг. 2, U ^(O) увеличилось с 0,51 до 0,8, а τ ^(O) уменьшилось с 23 до 8,5 мс при увеличении V от 0 до 60 мВ. Преобразование этих данных в дает зависимости параметров привязки от напряжения, показанные на рис. 4 как ○. На рисунке также показаны графики аналогичных данных из репрезентативного эксперимента с K ⁺ -Рингер, который будет описан позже (рис.{({\ mathrm {O}})} (0) \; = \; 200 \; {\ mathrm {nM}}; \; {\ mathrm {v}} _ {{\ mathrm {s}}} \ ; = \; 44 \; {\ mathrm {mV}}] \ end {формула *}

⁠. Соответственно, рис. 4B показывает, что k ^(O) _на не имеет систематической тенденции со средним значением 110 с ^-1 мкМ ^-1 . Средние значения k ^(O) _на , k ^(O) _от (0), K ^(O) (0) и v _s

\ begin {уравнение *} (n \; = \; 10) \ end {уравнение *}

приведены в столбцах 2–5 таблицы.

Рис. 4C также показывает, что кажущаяся константа диссоциации, K ^(O) _app , оцененная по разблокировке каналов Shaker -h5, систематически ниже, чем K ^(O) . Это согласуется с идеей о том, что уменьшение токсинового блока происходит в открытом состоянии, так что эффект сильно уменьшается, если каналы посещают часто и в течение относительно длительных периодов инактивированное (закрытое) состояние.

PVIIA имеет очевидный свободный доступ к месту блока даже тогда, когда каналы закрыты во время гиперполяризации покоя. Константу диссоциации связывания PVIIA с закрытыми каналами, K ^(C) , можно легко измерить по уменьшению с [T] ранних ответов на импульсную стимуляцию в условиях покоя. Наши оценки K ^(C) в NFR, в диапазоне 35–80 нМ, существенно не различались для каналов Shaker -h5 или Shaker -Δ (таблица, столбец 6).Эти оценки примерно в четыре раза ниже, чем у K ^(O) (0), и важно знать, какие изменения кинетических параметров связывания токсина вносят вклад в эту разницу.

Кинетику связывания PVIIA с закрытыми каналами нелегко измерить с помощью экспериментов по промыванию / отмыванию, потому что тестирование токсинового блока в любое время сильно нарушает сам блок и меняет значение последующих тестов.Правильный эксперимент по промыванию / отмыванию следует проводить повторно с тестированием системы быстрой перфузии в каждом пробном блоке PVIIA в разное время от промывки. Однако заметное изменение блока PVIIA, вызванное деполяризацией импульса, позволяет нам провести концептуально идентичный эксперимент, тестируя в разное время повторное уравновешивание послеимпульса связывания PVIIA с закрытыми каналами. На фиг.5 показаны результаты эксперимента с двойным импульсом на ооците, экспрессирующем Sh -Δ каналов.Каждая стимуляция состояла из двух последовательных импульсов от 40 мс до 40 мВ, разделенных переменным периодом покоя, T _i , при -100 мВ. На рис. 5 вверху показаны отклики для T _и , увеличивающиеся с 5 до 200 мс, зарегистрированные до и после добавления 200 нМ PVIIA к раствору NFR для купания. Видно, что два последовательных отклика в контрольном эксперименте всегда практически идентичны, что указывает на то, что каналы полностью восстанавливают свое состояние покоя через 5 мс при -100 мВ.В случае PVIIA, однако, второй ответ демонстрирует долгую память об эффектах, вызванных первым импульсом: для коротких межимпульсов в нем преобладает фаза быстрого нарастания, как и в реакции без токсинов, и его «тонические» характеристики полностью не восстанавливаются. даже через 200 мс. На рис. 5, внизу слева, представлены графики зависимости от T _и отношения ранних токов, вызванных вторым и первым импульсами в полупериод реакции без токсинов. Это отношение, которое практически равно единице в контрольных измерениях для всех T _и , с PVIIA составляет ∼4 для

\ begin {equal *} {\ mathrm {T}} _ {{\ mathrm {i}}} \; = \; 5 \; {\ mathrm {ms}} \ end {формула *}

⁠, и все еще ∼2 для

\ begin {формула *} {\ mathrm {T}} _ {{\ mathrm {i}} } \; = \; 200 \; {\ mathrm {ms}} \ end {формула *}

⁠.{({\ mathrm {C}})} \; = \; 0,22 \ end {формула *}

⁠, с постоянной времени τ ^(O) , равной 190 мс. Мы интерпретируем U ^(O) как вероятность отсутствия токсинов открытых каналов в конце кондиционирующего импульса, U ^(C) как равновесную вероятность отсутствия токсинов закрытых каналов и τ ^(C) как время релаксации связывания ПВИИА с закрытыми каналами. Соответственно, последние две величины дают оценки констант скорости ассоциации и диссоциации, k ^(C) _на и k ^(C) _от , связывания PVIIA с закрытыми каналами.{({\ mathrm {C}})} \; = \; 56 \; {\ mathrm {nM}} \ end {формула *}

⁠. Средние оценки

\ begin {уравнение *} (n \; = \; 8) \ end {уравнение *}

приведены в таблице. По сравнению со свойствами открытого канала скорость и включения, и выключения привязки PVIIA к закрытым каналам намного ниже. Примерно в четыре раза более высокое значение K ^(O) (O) по сравнению с K ^(C) является результатом комбинации увеличения скорости диссоциации PVIIA в ~ 24 раза и увеличения скорость ассоциации в ∼6 раз.Самый важный вывод из этих измерений состоит в том, что, хотя низкое значение k ^(C) _off может рассматриваться как экстраполяция на гиперполяризованные потенциалы зависимости напряжения k ^(O) _off (см. Рис. 4 A), шестикратное меньшее значение k ^(C) _на несовместимо с независимостью от напряжения k ^(O) _на (см. Рис. 4 B) и указывает на то, что закрытые каналы действительно обладают разными свойствами связывания токсинов.В двух ооцитах применялся описанный выше протокол с двумя импульсами с использованием переменных удерживающих потенциалов от -60 до -120 мВ, и мы не наблюдали значительных изменений в оценках параметров связывания (данные не показаны). Таким образом, в отличие от открытых каналов, взаимодействие PVIIA с закрытыми каналами оказывается нечувствительным к напряжению, и этот вывод также качественно согласуется с приведенным выше наблюдением, что даже при больших положительных потенциалах каналы Shaker -h5, закрытые воротами инактивации кажутся защищенными от разблокировки токсинов.

Из-за инактивации восстановление тонического связывания PVIIA с каналами Shaker -h5 после кондиционирующего стимула выглядит довольно странным, как показано на рис. 6. Контрольные записи из протокола двойных импульсов следуют классической схеме, показывающей, что второй отклик увеличивается с T _i по мере того, как больше каналов восстанавливается после инактивации, вызванной кондиционирующим импульсом: отношение второго пикового тока к первому приближается к 1 в виде одной экспоненты с постоянной времени 28 мс (рис.6, ○ и сплошная линия слева внизу). Записи с добавлением 100 нМ PVIIA в ванну вместо этого показывают заметный выброс второго отклика, который спадает очень медленно. Этот эффект имеет простое объяснение, если мы предположим, что восстановление после разблокировки, вызванное кондиционирующим импульсом, происходит намного медленнее, чем восстановление после инактивации. Соответственно, как показано на фиг. 6, внизу справа, доля свободных от токсинов каналов, оцененная на основе отношения токсина к контролю во втором пиковом ответе, монотонно уменьшается с T _i .{({\ mathrm {C}})} \; = \; 78 \; {\ mathrm {nM}} \ end {формула *}

⁠. Средние оценки параметров связывания ПВИИА с закрытыми каналами Shaker -h5 приведены в таблице. Видно, что они существенно не отличаются от каналов Shaker -Δ, подтверждая идею о том, что PVIIA не различает состояние покоя двух фенотипов.

Зависимость от напряжения диссоциации PVIIA из открытых каналов сильно напоминает свойства CTX-блока Са-активированных калиевых каналов (MacKinnon and Miller 1988) или Shaker каналов (Goldstein and Miller 1993), которые возникают в результате взаимодействия CTX. с ионами калия, занимающими внешний участок в поре канала.Чтобы исследовать взаимодействие PVIIA с ионами калия, мы изучили влияние PVIIA на каналы Sh -Δ с использованием высоких внеклеточных концентраций ионов калия,

\ begin {формула *} [{\ mathrm {K}}] _ {{ \ mathrm {o}}} \; = \; 115 \; {\ mathrm {mM}} \ end {формула *}

⁠. Для более надежных измерений в диапазоне напряжений характеристик отрицательного сопротивления этого препарата было проведено несколько экспериментов на иссеченных наружных участках, но очень похожие результаты были получены за пределами этого диапазона из экспериментов на целых ооцитах.

На рис. 7 показан типичный эксперимент с участком наружу, подвергнутым воздействию симметричных 115-мМ растворов K ⁺ . На рис. 7А показаны наложенные записи тока из стандартных протоколов вольт-амперной стимуляции, применявшихся до (слева) и после (в центре) добавления во внешнюю ванну 1 мкМ PVIIA. На правой диаграмме представлены графики запаздывающих токов в конце импульсов длительностью 100 мс в зависимости от импульсного напряжения.Видно, что 1 мкМ PVIIA блокирует большую часть входящих токов, но оказывает гораздо меньшее влияние на выходящие токи при больших деполяризациях. Это согласуется с результатами, полученными с помощью NFR

\ begin {equal *} ([{\ mathrm {K}}] _ {{\ mathrm {o}}} \; = \; 2.5 \; {\ mathrm {mM} }) \ end {формула *}

во внешней ванне. Интерпретируя стационарные отношения токсина к управляющим токам как вероятности отсутствия токсинов, мы получаем для константы диссоциации открытого канала K ^(O) , аналогичные оценки и такую ​​же зависимость от напряжения, как в NFR (рис.4 C, • и средние оценки в таблице).

Сравнение всего времени реакции теста и контроля также показывает, что релаксация токсин-блокирования имеет свойства, аналогичные тем, которые наблюдаются в растворах с низким K ⁺ , хотя и начиная с другого равновесия блока покоя. На рис. 7B показаны три контрольные записи в A

\ begin {формула *} ({\ mathrm {for \; V}} \; = \; — 40, \; + 20, \; {\ mathrm {и }} \; + 60 \; {\ mathrm {mV}}) \ end {формула *}

с наложением соответствующих записей под токсином с постоянным коэффициентом 3.3. Видно, что при таком масштабировании токи, зарегистрированные при +20 мВ, совпадают почти точно для всей длительности импульса, тогда как совпадение для других записей хорошее только для начальной фазы нарастания. В более позднее время входящие токи при -40 мВ дополнительно снижаются примерно в четыре раза, а исходящие токи при +60 мВ подвергаются примерно двукратному увеличению. Наиболее очевидная интерпретация этих результатов состоит в том, что две трети каналов тонически блокируются при 1 мкМ PVIIA в соответствии с константой диссоциации токсина из закрытых каналов, K ^(C) ∼ 430 нМ, что примерно равно K ^(O) при +20 мВ, тогда как деполяризации ниже или выше +20 мВ, приводящие к более низким или высоким значениям K ^(O) , вызывают увеличение или уменьшение блока PVIIA.В соответствии с этой интерпретацией, текущие отношения после почти полной активации следуют одноэкспоненциальной релаксации (рис. 7C, плавные линии), как и ожидалось от повторного уравновешивания реакции блокирования токсина. Подгоночные параметры этих релаксаций можно использовать для оценки констант скорости, характеризующих связывание PVIIA с открытыми каналами. Эти оценки для эксперимента по фиг. 7 показаны на фиг. 4A и фиг. B, •. Сравнение с данными, полученными в NFR (рис. 4, ○), показывает, что константы скорости ассоциации и диссоциации связывания PVIIA с открытыми каналами нечувствительны к изменениям [K] _o .Средние оценки k ^(O) _на , k ^(O) _от (0), K ^(O) (0) и v _s из четырех разных эксперименты приведены в столбцах 2–5 табл.

Из данных рис. 7В мы оцениваем тонический блок в 66% в 1 мкМ PVIIA, что соответствует константе диссоциации PVIIA, равной 430 нМ, и показывает, что, в отличие от свойств открытого канала, связывание PVIIA с закрытые каналы очень чувствительны к [К] _o .Наша средняя оценка K ^(C) из пяти ооцитов в

\ begin {Equation *} [{\ mathrm {K}}] _ {{\ mathrm {o}}} \; = \; 115 \; {\ mathrm {mM}} \ end {уравнение *}

было ∼400 нМ, что примерно в 8 раз больше, чем в

\ begin {equal *} [{\ mathrm {K}}] _ {{\ mathrm {o}} } \; = \; 2.5 \; {\ mathrm {mM}} \ end {формула *}

⁠. Мы можем спросить, имеет ли нижнее сродство PVIIA в

\ begin {equal *} [{\ mathrm {K}}] _ {{\ mathrm {o}}} \; = \; 115 \; {\ mathrm {mM} } \ end {формула *}

возникает из-за меньшей скорости ассоциации или большей скорости диссоциации при анализе эксперимента с двумя импульсами, такого как показанный на рис.8. Эксперимент проводился на всем ооците в присутствии 1 мкМ PVIIA, и протокол состоял из нескольких двойных стимуляций с импульсами до -20 мВ, разделенными переменным интервалом между импульсами (T _и ), что позволяло периоды покоя не менее 3 с между последовательными стимуляциями. На рис. 8А показан образец ответов, полученных для значений T _и между 30 и 420 мс. В соответствии с тем, что мы описали выше, мы наблюдаем, что кондиционирующий импульс вызывает усиление токсинового блока, которое проявляется в виде воспроизводимого пика в первом ответе на каждую последующую двойную стимуляцию.Однако для малых значений T _и второй ответ имеет более нормальный вид и не имеет пика, что указывает на то, что доля заблокированных каналов близка к равновесию для блокировки открытого канала при -20 мВ, которое уже было достигнуто к концу кондиционирующий импульс. Качественно о медленном восстановлении нижней равновесной вероятности связывания PVIIA с закрытыми каналами можно судить по повторному появлению пика во втором ответе, который отчетливо виден только в записях с

\ begin {equal *} {\ mathrm {T }} _ {{\ mathrm {i}}} \; = \; 180 \; {\ mathrm {or}} \; 420 \; {\ mathrm {ms}} \ end {формула *}

⁠.{({\ mathrm {C}})} _ {{\ mathrm {off}}} {\ mathrm {at}} \; [{\ mathrm {K}}] _ {{\ mathrm {o}}} \ ; = \; 115 \; {\ mathrm {mM}} \ end {уравнение *}

похоже на

\ begin {уравнение *} [{\ mathrm {K}}] _ {{\ mathrm {o} }} \; = \; 2.5 \; {\ mathrm {mM}} \ end {формула *}

в пределах экспериментальной ошибки. Напротив, увеличение [K] _o с 2,5 до 115 мМ уменьшает более чем на один порядок кажущееся значение k ^(C) _на , что, по-видимому, является единственным параметром связывания PVIIA. до Шейкер каналов, очень чувствительный к [K] _o .Обратите внимание, что мы изучили эффект увеличения [K] _o путем замены Na ⁺ на K ⁺ , так что этот эффект несопоставим с большим снижением скорости ассоциации токсинов, наблюдаемым при увеличении ионной силы для CTX-блока Ca ²⁺ -активированных каналов (Anderson et al. 1988) или Shaker каналов (Goldstein and Miller 1993).

Важным результатом нашего исследования для механистической интерпретации является то, что различное связывание PVIIA с закрытыми или открытыми каналами нельзя приписать исключительно зависимости скорости реакции от напряжения.Прежде всего, хотя низкое значение k ^(C) _от можно рассматривать как экстраполяцию k ^(O) _от (V) к гиперполяризующим потенциалам, независимость K ^(O) _на при напряжении и [K] _o несовместимо с 6- или 90-кратными нижними оценками K ^(C) _на при

\ begin {уравнение *} [{\ mathrm {K}}] _ {{\ mathrm {o}}} \; = \; 2.5 \; {\ mathrm {or}} \; 115 \; {\ mathrm {mM}} \ end {уравнение *}

⁠ .Во-вторых, наше наблюдение, что релаксация блока закрытых каналов не зависит от удерживающего потенциала в диапазоне от -60 до -120 мВ, показывает, что, в отличие от случая открытых каналов, связывание PVIIA с закрытыми каналами довольно эффективно. нечувствителен к трансмембранному напряжению. Действительно, тот факт, что инактивация защищает значительно деполяризованные каналы Shaker -h5 от расцепления токсина, согласуется с аналогичным связыванием PVIIA с любым непроводящим состоянием каналов при любом напряжении.

Важное соображение, которое апостериори оправдывает большую часть нашего экспериментального анализа, состоит в том, что ослабление связывания токсина с открытыми или закрытыми каналами происходит в очень разных временных масштабах. Средние свойства, которые мы ожидаем от мерцания между открытым и закрытым состояниями, взвешиваются для каждого состояния прямо пропорционально вероятности этого состояния и обратно пропорционально постоянной времени релаксации связывания в этом состоянии.Поскольку кинетика связывания для закрытых каналов как минимум в 10 раз медленнее, чем для открытых каналов, относительный вес открытого состояния в Sh -Δ каналах, которые не инактивируются, будет> 0,9 для любой вероятности открытия, P _{( О)} > 0,5. Поэтому справедливо предположить, что во время деполяризации неинактивирующих каналов мы по существу измеряем связывание с открытыми каналами. Менее благоприятна ситуация для каналов Shaker -h5, где P _(O) ∼ 0.1. В этом случае мы ожидаем, что относительный вес открытого состояния составляет ∼0,53, и это действительно хорошо согласуется с нашим выводом о том, что приложение K ^(O) _app , измеренное для каналов Shaker -h5, составляет ∼ 0,6 К ^(O) .

Структурное сходство PVIIA с токсинами скорпионов семейства харибдотоксинов (Scanlon et al. 1997) и сильная чувствительность эффективности PVIIA к мутациям некоторых аминокислотных остатков, которые, как считается, формируют преддверие внешней поры (Shon et al. .1998) указывают на то, что PVIIA действует как CTX, просто блокируя внеклеточное отверстие ионной поры. Результаты, представленные в этой статье, демонстрируют, что CTX и PVIIA также имеют сильное сходство в их механизме блокировки.

Что касается случая CTX-блока Ca ²⁺ -активированных каналов K ⁺ (MacKinnon and Miller 1988) или Shaker каналов (Goldstein and Miller 1993), мы обнаружили, что блок PVIIA сильно уменьшается во время открытия канала с зависимостью от напряжения, которая обеспечивается исключительно константой скорости диссоциации, а не скоростью связывания токсина.Кроме того, зависимость связывания PVIIA от состояния качественно очень похожа на ту, о которой сообщалось для связывания CTX с Ca ²⁺ -активированными каналами, которое происходит с более низкой скоростью ассоциации в семь-восемь раз, когда каналы полностью закрыты (Anderson et al. др. 1988 г.).

Единственное четкое различие между CTX и PVIIA, по-видимому, состоит в том, что последний связывается с гораздо более быстрой кинетикой из-за гораздо более высокой константы скорости диссоциации.Однако несколько вариантов CTX также блокируют открытые каналы Shaker с относительно быстрой кинетикой, которая наблюдалась при быстрой перфузии макрочастиц во время длительных деполяризующих разверток (Goldstein and Miller 1993; Goldstein et al. 1994). Интересно отметить, что почти все из более чем 60 вариантов CTX, охарактеризованных Goldstein et al. У 1994 года константы скорости ассоциации второго порядка близки к дикому типу и находятся в том же диапазоне (20–100 мкМ ^-1 с ^-1 ) наших оценок для PVIIA.Ни один из вариантов CTX не был изучен способом, который позволил бы четко отдельно охарактеризовать связывание с закрытыми и открытыми каналами, потому что медленные токсины изучались с помощью многоимпульсных протоколов, которые характеризуют связывание с закрытыми каналами, тогда как быстрые токсины тестировались на открытые — блок каналов с измерениями вливания / вымывания при длительных деполяризациях. Следовательно, у нас нет прямых доказательств того, что блок CTX каналов Shaker зависит от состояния. Однако один вариант, CTX-R25Q, был изучен с обоими протоколами, хотя и с разными [K] _o условиями (2 vs.100 мМ), и результаты двух измерений были совершенно разными: быстрый протокол давал в 5 раз больше k _на и в 10 раз больше k _на . Хотя авторы предлагают другое объяснение, относящееся к различным условиям [K] _o , мы замечаем, что этот результат фактически согласуется с блоком CTX, имеющим такую ​​же зависимость состояния, показанную здесь для блока PVIIA.

Хотя мы не можем исключить, что молекула PVIIA, связанная с открытым каналом, воспринимает значительную долю трансмембранного электрического поля, вышеупомянутые аналогии с CTX и антагонизирующее действие растворов с высоким содержанием K ⁺ на тоническую блокировку PVIIA предполагают, что разблокирование наблюдаемый при открытии каналов низкий внешний K ⁺ может в значительной степени возникать из-за дестабилизации связывания токсина внутренним K ⁺ , как в случае CTX (MacKinnon and Miller 1988).Результаты, сообщенные Garcia и Naranjo 1999, в значительной степени подтверждают эту гипотезу, показывая значительное снижение абсолютного значения и зависимости от напряжения скорости диссоциации токсина после предполагаемого полного удаления внутриклеточного K ⁺ . Ниже мы обсудим, что наши выводы о заметном различии между свойствами связывания токсина открытых и закрытых каналов и сильной [K] _o зависимости связывания с закрытым каналом также могут иметь простое объяснение в контексте модели, аналогичной к предложенному Маккинноном и Миллером 1988, в котором основным фактором, влияющим на связывание токсина, является состояние занятости самого удаленного участка связывания K ⁺ внутри пути проникновения в канал.

С этого момента мы будем ссылаться на этот сайт, как если бы он был единственным сайтом, связывающим K ⁺ . Общая схема, которую мы можем использовать для интерпретации наших данных, показана на схеме II.

Схема II предполагает, что токсин (Tx) может связываться с любым состоянием каналов с той же константой скорости ассоциации второго порядка, k ₁ , тогда как его константа скорости диссоциации первого порядка равна k ^(K) ₋₁ или k ⁽⁰⁾ ₋₁ , в зависимости от того, занят ли сайт связывания K ⁺ , и k ^(K) ₋₁ >> к ⁽⁰⁾ _-1 .В противном случае предполагается, что все константы скорости не зависят от напряжения. Схема также предполагает, что связывание K ⁺ находится в быстром равновесии и регулируется различными константами диссоциации, K ^(Tx) _d или K ⁽⁰⁾ _d , в зависимости от того, нет связанного токсина в преддверии внешней поры. В то время как связанный токсин блокирует внеклеточный доступ, предполагается, что связывание K ⁺ с порой находится в равновесии только с цитоплазматической концентрацией K ⁺ , [K] _i и скобкой в ​​переходе C: Tx ↔ C: K ⁺ : Tx указывает, что этот переход может происходить только при открытом канале.Возможная молекулярная картина состояний C: Tx и C: K ⁺ : Tx показана на рисунке 9. Когда канал закрыт и не заблокирован PVIIA [K] обозначает внеклеточный K ⁺ . концентрация, тогда как когда канал открыт [K] определяется потоком ионов в поре.

(Схема II)

В случае открытых каналов легко увидеть, что приведенная выше схема сводится к простой схеме с двумя состояниями I, если мы идентифицируем k ^(O) _на с k ₁ и k ^(O) _off со средним значением k ^(K) ₋₁ и k ⁽⁰⁾ ₋₁ , взвешенное согласно относительной вероятности состояний C: K ⁺ : Tx и C: Tx.{\ left \ left ({\ mathrm {Tx}} \ right) \ right} \ left \ left (0 \ right) \ right {\ mathrm {exp}} \ left \ left (- {{\ mathrm {V}) }} / {{\ mathrm {v}} _ {{\ mathrm {s}}}} \ right) \ right} {\ mathrm {,}} \ end {уравнение *}

2

, где K ^(Tx) _d (0) — константа диссоциации при 0 мВ, а зависимость от напряжения эквивалентно выражена, как если бы перенос заряда включал перемещение одного K ⁺ через фракцию

\ begin {уравнение *} {\ mathrm {{\ delta}}} \; = \; 25 \; {\ mathrm {mV}} / {\ mathrm {v}} _ {{\ mathrm {s}}} \ end {уравнение *}

трансмембранного напряжения.{({\ mathrm {O}})} _ {{\ mathrm {on}}} \; = \; k_ {1} \ end {формула *}

не имеет никакого отношения к условиям внеклеточного раствора, это сильный прогноз схемы II, что было подтверждено в наших сравнительных экспериментах с растворами с низким или высоким K ⁺ . Также обратите внимание, что Схема II приводит нас к выводу, что наши независимые от напряжения оценки k ^(O) _на обеспечивают прямое измерение истинной константы скорости ассоциации PVIIA с открытыми каналами.

Выражение k ^(O) _от в соответствии с тем же, что использовалось Маккинноном и Миллером 1988 для описания напряжения и зависимости [K] _i константы скорости диссоциации CTX от Ca ^{. 2+} -активированных каналов K ⁺ и предсказывает, что обе зависимости должны быть сигмоидальными.{\ left \ left ({\ mathrm {Tx}} \ right) \ right} \ left \ left (0 \ right) \ right} {\ left \ left [{\ mathrm {K}} \ right] \ right _ {{\ mathrm {i}}}} \ right) \ right {\ mathrm {.}} \ end {уравнение *}

В исследовании одиночных каналов, восстановленных в липидных бислоях, MacKinnon и Miller 1988 смогли показать тенденцию к насыщению сайта связывания K ⁺ , используя значения [K] _i до 700 мМ. Точно так же, регулируя внутренний Ca ²⁺ для поддержания открытия каналов при гиперполяризованных потенциалах, они также могут приблизиться к конечному нижнему пределу k ^(O) _от .По их данным можно оценить K ^(Tx) _d (0) значений в диапазоне 1–3 M, k ^(K) ₋₁ / k ⁽⁰⁾ _-1 отношения (β _max / β _min , по их терминологии) в диапазоне 20–50, а значение δ близко к 1. Как обсуждается ниже, это практически невозможно в препарате ооцитов. для изучения блока открытого канала с помощью PVIIA за пределами диапазона экспоненциального роста k ^(O) _от , так что наложение согласованности наших данных дает только более низкие оценки для K ^(Tx) _d (0) и k ^(K) ₋₁ и хорошая оценка v _s .Наша общая средняя оценка v _s ∼ 40 мВ, соответствующая

\ begin {уравнение *} {\ mathrm {{\ delta}}} \; = \; 0,63 \ end {уравнение *}

⁠, находится в хорошем согласие с оценками

\ begin {уравнение *} {\ mathrm {{\ delta}}} \; = \; 0.55 \ end {уравнение *}

, полученным Скэнлоном и др. 1997 из зависимости τ ^(O) от напряжения при низких значениях [T], для которых τ ^(O) ∼ 1/ k ^(O) _off . Низкие оценки δ, в диапазоне от 0,31 до 0,62, были также обнаружены в исследовании Goldstein и Miller 1993 зависимости от напряжения блока открытого канала Shaker несколькими вариантами CTX с относительно быстрой кинетикой связывания.

Наши измерения k ^(O) _от не показывают очевидного отклонения от экспоненциального роста до

\ begin {уравнение *} {\ mathrm {V}} \; = \; + 80 \; {\ mathrm {mV}} \ end {формула *}

⁠, где k ^(O) _off ∼ 200 s ⁻¹ (рис. 4 A). Таким образом, для согласования с этими данными подразумевается k ^(K) ₋₁ >> 200 с ⁻¹ и K ^(Tx) _d (0) >> [K] _i * e ² ; я.е., K ^(Tx) _d (0) >> 0,8 M, что качественно согласуется с исследованиями блока CTX. Большая нижняя оценка k ^(K) _-1 объясняет, почему также низкий пьедестал, предсказанный при отрицательных напряжениях, не виден в наших данных. Согласно схеме II, k ⁽⁰⁾ _-1 является нижней границей константы скорости диссоциации в любой конфигурации канала, так что k ⁽⁰⁾ _-1 ≤ k ^(C) _от ∼ 1 с ⁻¹ .{-} 1 \; {\ mathrm {at \; V}} \; = \; 0 \ end {формула *}

⁠, мы ожидаем, что k ^(O) _off приближается только к низкому пьедесталу для напряжений более отрицательных, чем −80 мВ, где невозможно исследовать открытые каналы. {{\ mathrm {Tx }}} \ left \ left (0 \ right) \ right> 1 \; {\ mathrm {M; {\ delta}}} = 0.63 {\ mathrm {.}} \ End {формула *}

Обсудим теперь предсказания схемы II для случая закрытых каналов. Как уже предполагалось, наиболее важным отличием от предыдущего случая является отсутствие переходов C: Tx ↔ C: K ⁺ : Tx. Дополнительным важным отличием является тот факт, что переходы C: ↔ C: K ⁺ включают только очень быстрое уравновешивание с внешним K ⁺ .С этими двумя условиями Схема II сводится к Схеме III, где {U} объединяет вместе разблокированные состояния C: и C: K ⁺ , а p — вероятность того, что состояние U является состоянием C: K ⁺ . Дальнейшее упрощение вытекает из приведенного выше рассмотрения, что k ^(K) ₋₁ в несколько сотен раз больше, чем k ⁽⁰⁾ ₋₁ , что означает, что вероятность состояния C: K ⁺ : Tx не имеет значения по сравнению с состоянием C: Tx для p <0.{({\ mathrm {C}})} _ {{\ mathrm {on}}} \; = \; (1 \; - \; {\ mathrm {p}}) * k_ {1} \ end {уравнение *}

⁠. Оба наших вывода о том, что k ^(C) _off не зависит от [K] _o и k ^(C) _на уменьшается при увеличении [K] _o , полностью согласуются с этим интерпретация. В принципе, зависимость [K] _o k ^(C) _от может быть использована для оценки константы диссоциации связывания K ⁺ с внешним сайтом, K ⁽⁰⁾ _д .{\ left \ left (0 \ right) \ right}} {\ mathrm {.}} \ end {уравнение *}

Поскольку у нас есть данные только для двух значений [K] _o , 2,5 и 115 мМ, наши оценки K ⁽⁰⁾ _d могут быть очень приблизительными. Для

\ begin {уравнение *} [{\ mathrm {K}}] _ {{\ mathrm {o}}} \; = \; 2.5 \; {\ mathrm {mM}} \ end {уравнение *}

⁠ , мы оцениваем k ^(C) _на ∼ 1/6 k ^(O) _на (т.е.{({\ mathrm {O}})} _ {{\ mathrm {on}}} \; [{\ mathrm {ie}}., \; (1 \; — \; p) \; {\ sim} \; 1/90] \ end {формула *}

⁠. Эти два данных примерно совпадают, давая оценки K ⁽⁰⁾ _d , равные 0,5 или 1,3 мМ, соответственно. Обратите внимание, что эти предположения подразумевают, что отношение K ^(Tx) _d (0) / K ⁽⁰⁾ _d находится в порядке 10 ³ , что близко к нашей нижней оценке для отношение k ^(K) ₋₁ / k ⁽⁰⁾ ₋₁ .Это важная проверка физической согласованности схемы II, которая требует, чтобы дестабилизация связывания PVIIA с помощью K ⁺ влекла за собой реципрокный эффект PVIIA на связывание K ⁺ .

(Схема III)

(Схема IV)

Низкое значение δ, отвечающее за дестабилизацию зависящей от напряжения связывания PVIIA с открытыми каналами Shaker , может контрастировать с моделью, лежащей в основе Схемы II.Нахождение значения δ, близкого к 1, было использовано Маккинноном и Миллером 1988 в качестве доказательства того, что сайт связывания K ⁺ расположен на крайнем внешнем конце поры проводимости K ⁺ , откуда K ⁺ дестабилизирует Связывание CTX за счет ускорения диссоциации CTX в 20 раз. Используя ту же модель, мы обнаружили, что диссоциация PVIIA ускоряется K ⁺ по крайней мере в 10 раз больше ( k ^(K) _-1 / k ⁽⁰⁾ ₋₁ >> 200), так что мы могли бы интуитивно ожидать, что сайт, из которого K ⁺ отталкивает токсин, находится еще больше на внешней границе пути проводимости пор.Однако может быть наивным интерпретировать δ как истинное электрическое расстояние, которое проходит один K ⁺ , который покидает цитоплазматическую среду и проходит через поры, чтобы достичь наиболее удаленного сайта связывания в пути проводимости. Правдоподобная и более реалистичная интерпретация проиллюстрирована рисунком на рис. 9. Можно с уверенностью предположить, что проводящая пора содержит три места связывания, что согласуется с классическими моделями, предложенными для объяснения диффузионных свойств однофайловых калиевых каналов (Hille and Schwartz, 1978; обзор см. В Hille 1992), а также в структурных исследованиях Doyle et al.1998. Также правдоподобно предположить, что, когда устье внешней поры закупоривается молекулой токсина, пора всегда имеет один, но очень маловероятно, что все три из этих связывающих сайтов заняты. Соответственно, профессиональные конфигурации, которые наиболее значимо представляют состояния, указанные на схеме II как C: Tx и C: K ⁺ : Tx, могут быть теми, которые показаны на рис. 9. Если это так, переход от C: Tx к C: K ⁺ : Tx будет включать согласованное движение двух ионов калия, каждый из которых проходит только часть электрического расстояния через пору; необходимое выталкивание / притяжение интеркалированных молекул воды может быть ослаблено водным шунтом токсиновой пробки.Даже если предположить отсутствие падения напряжения от крайнего участка к внешнему вестибюлю, переход может включать для каждого иона значение δ, равное 1/3, и это даст видимое общее значение

\ begin {уравнение *} {\ mathrm {{\ delta} \; of}} \; 2/3 \; = \; 0,66 \ end {формула *}

⁠, что соответствует нашим измерениям.

Клиновой блок для установки грохота сланца и дополнительная информация

Блок клина для грохота встряхивателя — это блок пресса, предназначенный для плотного зажима или натяжения панели грохота на деке встряхивающего устройства.

Клин-блоки приложений

Клинковые блоки используются в основном для установки рамных вибросит. И экран стальной рамы, и экран композитной рамы. Например, экран серии King Cobra, экран Mongoose, экран серии KEMTRON KPT. Обычно мы используем клиновые блоки вместе с молотком, чтобы выбивать его как можно более устойчиво

Клинья для грохота встряхивателя

Блок клина экрана

Shaker — это простой инструмент для установки или удаления экранной панели. Довольно прост в эксплуатации.Когда мы правильно устанавливаем экранные панели на шейкерную платформу, мы вставляем клиновой блок в нужное пространство между установочной пластиной и панелью экрана. Верхняя сторона клинового блока должна быть установлена ​​параллельно верхней стороне установочной пластины. Убедившись в точности, мы используем молоток, чтобы постучать по блоку как можно сильнее. Каждая экранная панель запрашивает 2 блока для защиты. Повторите то же действие на другой стороне экрана.

Блок клиновой тип

Типы клиновых блоков сильно различаются у разных производителей.Независимо от цвета, формы, внутренней структуры и т. Д. Айпу может производить черный, желтый и красный цвета. Что касается конструкции, некоторые из них представляют собой цельные блоки из полиуретана, а некоторые из них представляют собой стальную опору, залитую полиуретаном для большей прочности

А размер клиновых блоков зависит от конструкции эксплуатируемого вибратора. Дополнительная деталь — это пространство между панелью экрана и установочной пластиной. Например, общая длина клинового блока экрана Mongoose составляет около 380 мм, а клинового блока экрана серии Cobra — около 340 мм при максимальной высоте 71 мм.

Клиновые блоки Aipu для грохота шейкера

Aipu производит множество различных типов клиновых блоков. Для экрана серии Cobra, шейкер Mongoose PT и т. Д. Популярными блоками являются блок экрана серии Cobra и блок экрана Mongoose шейкер. В настоящее время цвета могут быть черными, красными и желтыми. По особым требованиям клиентов мы можем предоставить другие цвета для большего количества вариантов.

Перед заказом сообщите нам, какой шейкер или грохот вы используете. Или укажите размер, который поможет нам предоставить вам точный блок.

.